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影響MSC干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基滅菌的7個(gè)因素

更新時(shí)間:2020-07-15 點(diǎn)擊次數(shù):1629
  MSC無血清培養(yǎng)基,用于培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞 ,可在臨床和研究中用于臍帶或者臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的培養(yǎng)擴(kuò)增。MSC干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基滅菌是否*,直接影響科研檢測(cè)數(shù)據(jù),影響培養(yǎng)基滅菌的因素很多,除了MSC干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量,滅菌時(shí)間長短和溫度高低,還取決于以下幾點(diǎn)
  1、營養(yǎng)成分的保持
  濕熱滅菌時(shí),微生物被殺死的同時(shí),培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞,特別是氨基酸和維生素。如在121℃,僅20min,就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞,蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng),造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化,因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。
  2、微生物的耐熱性
  細(xì)菌芽孢的熱阻較大,滅菌所需要的時(shí)間取決于把細(xì)菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時(shí)間。
  3、pH值
  pH值對(duì)微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時(shí),微生物不易死亡。pH<6.0時(shí),微生物比較容易死亡,此時(shí)PH很容易滲入微生物的細(xì)胞,從而改變細(xì)胞的生理反應(yīng),促使其死亡。所以培養(yǎng)基的pH越低,所需的時(shí)間也越短。
  4、培養(yǎng)基的成分
  油脂、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機(jī)物會(huì)包于細(xì)胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導(dǎo)。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性,滅菌較易。例如:大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡,在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡,在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時(shí)候選用115℃,30分鐘;一般的培養(yǎng)基可選擇121℃20分鐘。
  5、泡沫
  泡沫中的空氣形成隔熱層,使熱量難以滲透進(jìn)去,殺死其中的雜菌。
  6、顆粒
  顆粒小,容易滅菌,顆粒大,則難滅菌。對(duì)于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基,可用粗濾的方法(不應(yīng)影響培養(yǎng)基質(zhì)量)予以除去,培養(yǎng)基結(jié)塊會(huì)造成培養(yǎng)基滅菌的不*。
  7、滅菌鍋內(nèi)空氣是否排凈
  這個(gè)是影響滅菌是溫度和壓力比例關(guān)系的要點(diǎn),同樣達(dá)到了相同的壓力的情況下,如果空氣未能排凈,也就是說不是純蒸汽滅菌,此時(shí)的溫度不一定能達(dá)到目的要求,會(huì)嚴(yán)重影響滅菌效果

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